MDA的研究方法
MDA采用不同濃度MDA體外干預(yù)大鼠肝線(xiàn)粒體,氧電極法檢測(cè)線(xiàn)粒體呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O),測(cè)定呼吸鏈復(fù)合物及α-酮戊二酸脫氫酶、丙酮酸脫氫酶、蘋(píng)果酸脫氫酶活性.結(jié)果:線(xiàn)粒體經(jīng)MDA作用后,以蘋(píng)果酸/谷氨酸或琥珀酸作底物,線(xiàn)粒體兩條呼吸途徑對(duì)MDA呈現(xiàn)不同的耐受力,前者在MDA100μmol/L時(shí)RCR顯著降低(P<0.05),400μmol/L時(shí)P/O降低(P<0.05);后者M(jìn)DA濃度達(dá)到400和800μmol/L時(shí),線(xiàn)粒體P/O及RCR值顯著降低(P<0.05)。丙酮酸脫氫酶及α-酮戊二酸脫氫酶分別在50μmol/L和100μmol/L時(shí)活性下降(P<0.05),而MDA濃度達(dá)到1mmol/L時(shí),蘋(píng)果酸脫氫酶活性降低(P<0.05)。呼吸鏈復(fù)合物Ⅰ、Ⅱ分別在MDA400和800μmol/L時(shí)最大反應(yīng)速度(Vm)降低(P<0.05),但MDA(0~3.2 mmol/L)對(duì)呼吸鏈復(fù)合物Ⅲ、Ⅳ的Vm及米氏常數(shù)(Km)沒(méi)有影響。結(jié)論:MDA對(duì)線(xiàn)粒體呼吸鏈及α-酮戊二酸脫氫酶、丙酮酸脫氫酶、蘋(píng)果酸脫氫酶存在不同程度的損傷作用,不同酶對(duì)MDA損傷的敏感程度有所差異,本研究中相關(guān)酶受MDA損傷的次序可能是:丙酮酸脫氫酶、α-酮戊二酸脫氫酶、呼吸鏈復(fù)合物Ⅰ、呼吸鏈復(fù)合物Ⅱ、蘋(píng)果酸脫氫酶、呼吸鏈復(fù)合物Ⅲ、Ⅳ.